導航：安全管理網(wǎng)>> 安全論文>> 食品安全論文>>正文

高效液相色譜同時測定水產(chǎn)品中7種磺胺類藥物殘留的方法改進

文檔作者：區(qū)敏霞文檔來源：佛山市高明區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)推廣中心		點擊數(shù)：	更新時間： 2025年06月13日
下載地址：點擊這里	文件大?。?2.20 MB 共3頁	文檔格式： PDF	下載點數(shù)： 1 點（VIP免費）

全屏查看

內(nèi)容預(yù)覽 [文件共3頁]

本文件共3頁，如需編輯使用，請下載。

注：預(yù)覽效果可能會出現(xiàn)部分文字亂碼（如口口口）、內(nèi)容顯示不全等問題，下載是正常的。

	文件大?。?.20 MB 共3頁文件格式：PDF 下載點數(shù)：1 點（VIP會員免費）

上一篇：高效液相色譜在食品檢測中的應(yīng)用

文本預(yù)覽

僅提取頁面文字內(nèi)容，供快速閱讀使用。

Jul. 2017 CHINA FOOD SAFETY 133
科技文苑
磺胺類藥物（Sulfonamides，
SAs）是應(yīng)用最早的一類人工合成抗菌
藥物，具有抗菌譜廣、抗菌力強、吸
收迅速完全和價格低廉等特點，在水
產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用廣泛[1]，由于SAs 在動
物體內(nèi)的作用時間和代謝時間較長，
容易造成動物組織中SAs 殘留，人們
食用該類藥物殘留的水產(chǎn)品后會出現(xiàn)
急性或慢性中毒，能夠產(chǎn)生泌尿、免
疫和造血系統(tǒng)紊亂的副作用，危害人
類健康，造成環(huán)境污染，嚴重影響我
國水產(chǎn)品出口，造成巨大的經(jīng)濟損失。
為保障人類健康，各國對SAs 殘留量
限制越來越嚴格，我國農(nóng)業(yè)部235 號
公告《動物性食品中獸藥最高殘留限
量》中規(guī)定SAs 總量不得超過100 ng/
mL。加強對水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留
的監(jiān)測，對保護消費者健康，保障水
產(chǎn)品的進出口貿(mào)易具有重要意義。目
前，水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留的檢測
方法，文獻報道有酶聯(lián)免疫法[2]、膠
體金免疫層析法[3]、高效液相- 柱后
衍生熒光色譜法[4]、高效液相色譜-
紫外光譜法[5]、高效液相色譜- 質(zhì)譜
法[6] 等。由于高效液相色譜儀的普及，
相較高效液相色譜- 質(zhì)譜方法，高效
液相色譜法成本較低，易于推廣。
1 實驗部分
1.1 材料與試劑
磺胺類藥物標準品： 磺胺嘧啶
（SD）、磺胺甲基嘧啶（SMR）、磺胺
5- 甲氧嘧啶（SMD）、磺胺二甲基嘧
啶（SM2）、磺胺甲氧噠嗪（SMP）、
磺胺氯噠嗪（SCP）、磺胺6- 甲氧嘧
啶（SMM）、磺胺甲基異惡唑（SMZ）、
磺胺異惡唑（SFZ）、磺胺二甲氧噠
嗪（SDM）、磺胺喹噁啉（SQX），
純度均大于98.0％， 均購自德國Dr.
Ehrenstorfer GmbH 公司。
主要試劑：乙腈（色譜純）、乙
酸乙酯（色譜純）、甲醇（色譜純）、
正己烷（色譜純），以上試劑均為德
國Merck 公司；冰乙酸（優(yōu)級純）。
固相萃取柱（Waters Oasis HLB，
60mg/3mL）。
1.2 儀器與設(shè)備
液相色譜儀（ 配備DAD 檢測器
Agilent1200，美國安捷倫公司）；電
子天平（感量0.000 1 g，TP214，北
京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電
子天平（感量0.01 常熟市雙杰測試儀
器廠）；均質(zhì)機（8 000 ～ 30 000 r/
min，德國IKA 型號T10 B）；離心機（5
000r/min 德國希格瑪公司3K15）；旋
高效液相色譜同時測定水產(chǎn)品中7 種磺胺類藥物
殘留的方法改進
□ 區(qū)敏霞 佛山市高明區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)推廣中心
摘 要：目的：本方法是在農(nóng)業(yè)部公告的標準方法的基礎(chǔ)上改進，縮短檢測時間，提高檢測效率。方法：樣品經(jīng)過乙
酸乙酯提取、正己烷脫脂和HLB 固相萃取小柱凈化后，采用agilentXDB-C18 色譜柱，以甲醇- 乙腈- 乙酸為流動相洗脫分離
后，經(jīng)過DAD 檢測器分析、外標法定量。結(jié)果：7 種磺胺類藥物能有效分離，本實驗室所建立的高效液相色譜紫外法測定
水產(chǎn)品中7 中磺胺類藥物殘留的檢測方法，對比國標法縮短了分析時間。
關(guān)鍵詞：磺胺類藥物；高效液相色譜；固相萃??；檢出限；回收率
萬方數(shù)據(jù)
134 食品安全導刊 2017年7月
Technology
科技
科技文苑
轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠RE-
5286A）；漩渦混勻器（德國Heidolph
型號Multi Reax）；超聲波清洗儀（昆
山市超聲儀器有限公司）；超純水儀
（ 美國Millipore 公司Direct-Q3）；
固相萃取裝置（美國Supelco 公司）；
移液器（量程0.5 ～ 5 mL，Thermo；
100 ～ 1 000 μL，20 ～ 200 μL，芬
蘭百得）。
1.3 主要溶液配制
（1）標準儲備液配制。精密稱取
7 種磺胺類藥物各（10±0.01）mg，
用甲醇分別溶解并定容于10 mL 棕色
容量瓶中，各種磺胺標準儲備液濃度
為1 000 μg/mL。避光冷藏保存6 個月。
（2）混合標準工作液10 μg/mL
的配制。分別準確移取各種磺胺儲備
液1 mL，置于100 mL 棕色容量瓶中，
用甲醇定容，冷藏避光保存1 個月。
（3）混合標準使用液的配制。準
確取適量混合標準工作液，流動相初
始比例稀釋并定容5 mL。依次配制成
0.1、0.5、1.0、2.0 μg/mL 的梯度濃度，
現(xiàn)用現(xiàn)配。
1.4 色譜條件
檢測波長：270 nm，柱溫：40 ℃，
流速：0.6 mL/min，進樣量：50 μL；
色譜柱：XDB-C18 柱（150 mm×4.6 mm
ID，5 μm，agilent 公司）；流動相A：
2％ 乙酸- 水溶液；流動相B：乙腈；
流動相C：甲醇。
流動相梯度見表1。
1.5 測定方法
1.5.1 樣品的提取
準確稱取常溫樣品（5.00±0.02）
g 于50 mL 離心管中，加入25 mL 乙酸
乙酯，超聲提取1 min，加入5 g 無水
硫酸鈉，14 000 r/min 均質(zhì)1 min，
旋渦混勻1 min，5 000 r/min 離心5
min，將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移到100 mL 梨
形瓶中。再向原離心管中加入25 mL
乙酸乙酯，旋渦混勻1 min，5 000 r/
表1 流動相梯度表
時間/min 流動相A/％ 流動相B/％ 流動相C/％
0.00 90.5 6.5 3
15.00 63 14 23
16.00 90.5 6.5 3
20.00 90.5 6.5 3
表2 7 種磺胺藥物的線性范圍、標準曲線回歸方程及相關(guān)系數(shù)表
藥物名稱
藥物名
稱縮寫
線性范圍
/（μg/mL）
回歸方程相關(guān)系數(shù)
磺胺嘧啶SD 0.1 ～ 2.0 Y=177.161 004X+1.131 752 8 0.999 43
磺胺二甲基嘧啶SM2 0.1 ～ 2.0 Y=136.886 48X+2.963 021 2 0.999 03
磺胺甲氧噠嗪SMP 0.1 ～ 2.0 Y=158.328 743X+1.144 242 4 0.999 22
磺胺6- 甲氧嘧啶SMM 0.1 ～ 2.0 Y=134.716 366X-3.219 279 9 0.998 90
磺胺甲基異惡唑SMZ 0.1 ～ 2.0 Y=1542.293 9X+18.365 813 0.999 07
磺胺二甲氧噠嗪SDM 0.1 ～ 2.0 Y=114.482 52X+2.168 376 5 0.999 11
磺胺喹惡啉SQX 0.1 ～ 2.0 Y=70.631 434X+2.489 189 6 0.999 10
表3 魚肉樣品中7 種磺胺藥物的添加平均回收率表
藥物名稱藥物名稱縮寫添加濃度/（μg/kg） 平均回收率
磺胺嘧啶SD 40 80 84.5 88.5
磺胺二甲基嘧啶SM2 40 80 82.5 84
磺胺甲氧噠嗪SMP 40 80 83 85
磺胺6- 甲氧嘧啶SMM 40 80 89 92
磺胺甲基異惡唑SMZ 40 80 81.5 82
磺胺二甲氧噠嗪SDM 40 80 80 82
磺胺喹惡啉SQX 40 80 77 83
min 離心5 min，將乙酸乙酯層合并于
100 mL 梨形瓶中，于30 ℃水浴中旋
轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。
1.5.2 凈化
先用1 mL 甲醇溶解上述殘渣，再
加入2 mL 1％ 乙酸溶液，渦旋混勻，
超聲1 min，轉(zhuǎn)移到新的50 mL 離心
管中，再向梨形瓶中加入1 mL 甲醇和
2 mL 1％ 乙酸溶液，重復(fù)上述操作。
向離心管中加入8 mL 正己烷，低速混
勻，8 000 r/min 離心5 min，棄去上
層正己烷層，加入8 mL 正己烷重復(fù)操
作一次，下層加水6 mL 稀釋，待過固
相萃取柱。
1.5.3 固相萃取過程
HLB 固相萃取柱的平衡：依次用3
mL 甲醇、6 mL 純水處理；上樣：將試
樣稀釋液以0.6 mL/min 速度流過HLB
小柱；洗滌：依次用3 mL 水、2 mL 5％
甲醇淋洗小柱；洗脫：最后用10 mL
甲醇洗脫，流速不超過0.6 mL/min；
收集洗脫液：洗脫液于30 ℃水浴中旋
轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用1 mL 流動相的初始比
例定容，過0.2 μm 有機膜，供液相
色譜測定。
2 結(jié)果與討論
2.1 標準曲線的制定
在1.4 的色譜條件下對配制標準
系列溶液進樣測定并繪制標準曲線，
見表2，標準品色譜圖參見圖1。
結(jié)果表明，7 種磺胺類藥物的標準
溶液在濃度為0.1 ～ 2.0 μg/mL，色譜
峰面積與濃度之間呈良好的線性關(guān)系，
相關(guān)系數(shù)均不小于0.995。
2.2 方法的回收率
向魚肉空白中添加40、80 μg/
kg7 種磺胺類標準物質(zhì)， 每個水平
設(shè)4 個平行對照組。分別稱取魚樣
萬方數(shù)據(jù)
Jul. 2017 CHINA FOOD SAFETY 135
科技文苑
（5.00±0.02）g，添加一定體積的標
準工作液，渦旋0.5 min，混勻后靜置
15 min，按樣品前處理方法處理后做
HPLC 分析。根據(jù)各組分的峰面積?？?
白樣品添加色譜圖見圖2，計算相應(yīng)濃
度的回收率見表3。
2.4 色譜條件的選擇的選擇
參照農(nóng)業(yè)部958 號公告-12-
2007[7] 標準，實驗中采用XDB-C18 柱，
比較不同比例的2％ 乙酸溶液+ 甲醇+
乙腈梯度洗脫，結(jié)果表明按照表1 的
流動相的濃度配比，7 種磺胺類藥物均
能達到基線分離，峰型尖銳，對稱性好，
而且出峰時間也得到縮短，縮短整個
運行時間，提高分析效率。
3 結(jié)論
本實驗在農(nóng)業(yè)部公告958-12-
2007 的標準方法的基礎(chǔ)上通過對色譜
條件的改進建立高效液相色譜法測定
水產(chǎn)品中7 種磺胺類藥物的分析方法，
該方法與國標方法比較，整個梯度洗
脫運行時間只需要16min，7 種磺胺類
藥物均能達到基線分離，峰型尖銳，
對稱性好，縮短了分析時間，減少有
機溶劑的使用，同時結(jié)果線性良好，
回收率也滿足分析要求，可用于日常
對水產(chǎn)品中磺胺類藥物的監(jiān)控檢測。
參考文獻
[1] 巢磊. 磺胺類藥物在水
產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J]. 水生態(tài)學雜
志,2002,22(3):50-51.
[2] 林品言, 杜紅梅. 酶聯(lián)免疫法
快速檢測水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留[J].
當代水產(chǎn), 2016, 41(10):94-95
[3] 謝瑜杰, 呼秀智, 孫曉錚,
等. 膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)
品磺胺類藥物殘留檢測中的應(yīng)用
研究進展[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學
報,2017,8(2):375-379.
[4] 鄭斌, 余海霞, 楊會成, 等. 高
效液相色譜- 在線柱后衍生熒光檢測
法同時測定水產(chǎn)品中14 種磺胺類藥物
殘留[J]. 食品科學,2012,33(4):230-
233.
[5] 徐維海, 林黎明, 朱校斌,
等. 水產(chǎn)品中14 種磺胺類藥物殘留
的HPLC 法同時測定[J]. 分析測試學
報,2004,23(5):122-124.
[6] 趙鵬, 劉鑫, 孫希彥, 等.HPLCMS/
MS 法測定水產(chǎn)品中14 種磺胺類藥
物[J]. 食品研究與開發(fā),2013(23):80-
83.
[7] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)業(yè)
部958 號公告-12-2007 水產(chǎn)品中磺
胺類藥物殘留量的測定液相色譜法 中
華人民共和國國家標準[S]. 北京: 中
國國家標準出版社,2007.
圖1 7 種磺胺類藥物濃度為1.0 μg/mL 的標準色譜圖
圖2 添加量為40 μg/kg 的樣品色譜圖

網(wǎng)友評論 more

食品安全論文最新內(nèi)容

06-13