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漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)安全性評價研究

文檔作者：宋愿智1*, 李秋菲1, 牟霄1, 廖德宏2, 王敏2, 孫文基3, 劉建書4, 甘志杰5, 許雪峰5, 張慶蘭6 ( 文檔來源： 1. 陜西省食品藥品檢驗(yàn)所 2. 陜西神龍藥業(yè)有限公司 3. 西北大學(xué) 4. 陜西省疾病控制預(yù)防中心 5. 漢中市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 6. 漢中市衛(wèi)生學(xué)校		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時間： 2025年06月24日
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第6 卷 第3 期 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報 Vol. 6 No. 3
2015 年3 月 Journal of Food Safety and Quality Mar. , 2015
*通訊作者: 宋愿智, 副主任藥師, 主要研究方向?yàn)槭称匪幤钒踩珯z測, E-mail: shipnshi@126.com
*Corresponding author: SONG Yuan-Zhi, Associate Chief Pharmaist, Shaanxi Institute for Food and Drug Control, NO.21,the 5th Road of Keji,
Gaoxin District, Xi’an 710065, China. E-mail: shipnshi@126.com
漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)
安全性評價研究
宋愿智1*, 李秋菲1, 牟 霄1, 廖德宏2, 王 敏2, 孫文基3, 劉建書4,
甘志杰5, 許雪峰5, 張慶蘭6
(1. 陜西省食品藥品檢驗(yàn)所, 西安 710065; 2. 陜西神龍藥業(yè)有限公司, 南鄭 723000; 3. 西北大學(xué), 西安 710068;
4. 陜西省疾病控制預(yù)防中心, 西安 710054; 5. 漢中市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心, 漢中 723000;
6. 漢中市衛(wèi)生學(xué)校, 漢中 723000)
摘要: 目的 對漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的服用安全性開展毒理學(xué)研究。方法按照國家標(biāo)準(zhǔn)要求和相關(guān)規(guī)
定, 首先進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn), 采用最大給藥量實(shí)驗(yàn)法(maximum tolerated dose, MTD), 然后進(jìn)行遺傳性毒
性試驗(yàn), 包括Ames 試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn), 最后進(jìn)行大鼠30 d 喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來評價其
毒理學(xué)安全性, 以2670.0、2002.5、1335.0 mg/kg·bw 三個劑量, 觀察大鼠體重、增重量、進(jìn)食量、食物利用率、
血常規(guī)等指標(biāo)的變化。結(jié)果 給最大給藥量(30000 mg/kg)的樣品灌胃后, 未見中毒癥狀, 無動物死亡; Ames 試
驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)3 項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性; 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 與對照
組相比, 各劑量組大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論本品在本實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)無毒, 無遺傳性產(chǎn)
品, 可以作為降血脂保健食品用于人體。
關(guān)鍵詞: 漢蓮牌紅靈丹膠囊; 毒理學(xué); 安全性
The toxicological safety evaluation and research of Hanlian brand
Monascus Ganoderma Salvia capsule
SONG Yuan-Zhi1*, LI Qiu-Fei1, MOU Xiao1, LIAO De-Hong2, WANG Min2, SUN Ji-Wen3,
LIU Jian-Shu4, GAN Zhi-Jie5, XU Xue-Feng5, ZHANG Qing-Lan6
(1. Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Xi’an 710065, China; 2. Shaanxi Shenlong Pharmaceutical Co., Ltd.,
Nanzheng 723000, China; 3. Northwest University, Xi’an 710068, China; 4. Shaanxi Center for Disease Control and
Prevention, Xi’an 710054, China; 5. Hanzhong City Food and Drug Inspection Testing Center, Hanzhong 723000, China; 6.
Hanzhong City Health Occupation Technical School, Hanzhong 723000, China)
ABSTRACT: Objective Tostudy the taking toxicoligical safety of Hanlian brand Monascus Ganoderma
Salvia capsule. Methods According to the national standard requirements and relevant provisions, at first,
acute mouth daimeter MTD maximum tolerated dose (MTD) was used to perform polar toxicity test. Then,
genetic toxicity test was also carried on, including Ames test, micrinucleus test of bone marrow cells in mice
and mouse sperm malformation test. Finally, 30 days rat feeding expermient was carried out to evaluate the
toxicoligical safety. The dose were 2670.0, 2002.5, 1335.0 mg/kg·bw respectively. Meanwhile the change of
body weight, weight gain, food intake, food utilization, routine serum index were observed. Results The
第3 期 宋愿智, 等: 漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)安全性評價研究 1089
maximum dosage of the sample after gavage, no poisoning symptoms and animal death occurred. The genetic
toxicity result of Ames test, mouse bone marrow cells micronucleus test and mouse sperm maformation test
were negative. Blood and serum indexes of each dose group had no significant difference compared with the
control group after 30 days feeding test (P>0.05). Conclusion This product is a non-toxic, no genetic toxicity
and non-toxic product in the scope of this experiment, and can be used as a kind of new hypolipidemic health
food.
KEY WORDS: Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule; toxicology; safety
1 引 言
漢蓮牌紅靈丹膠囊是由紅曲、靈芝和丹參三味中
藥材經(jīng)合理配方, 精制制成的一種新型純天然降脂
產(chǎn)品。三味中藥材均屬傳統(tǒng)用藥材料, 在我國已使用
多年。食用功能紅曲(monascus), 含有豐富的化學(xué)活
性物質(zhì), 具有降血脂、降血壓、抗腫瘤、抗疲勞、抗
動脈硬化、增強(qiáng)免疫力等藥理作用, 特別是主要成分
Mnacolin-K(酸式洛伐他汀)是一種新型降血脂藥物,
與單純洛伐他汀相比綜合療效顯著, 安全性高, 毒副
作用較小[1-5]。靈芝(ganoderma)是一種珍貴藥用菌,
含有豐富的活性成分, 其靈芝多糖(ganoderma
lucidum polysaccharides)具有廣泛的藥理活性, 被譽(yù)
為“生物免疫的調(diào)節(jié)劑和臟器損傷的修復(fù)劑”, 具有
提高機(jī)體免疫力、修復(fù)臟器損傷、抑制腫瘤、增強(qiáng)機(jī)
體耐缺氧能力、消除自由基、抗衰老、抗氧化、抗血
栓、抗血凝、抗病毒、降血糖、降血脂等作用[6-8]。
丹參(salvia), 其有效成分為丹參酮、丹參素、丹酚酸
等, 具有擴(kuò)張血管、抗動脈粥樣硬化、保護(hù)心肌、抗
血栓、改善微循環(huán)等多種藥理作用[9-12]。下面將對紅
靈丹膠囊進(jìn)行急性毒性、體內(nèi)外致突變及30 d 喂養(yǎng)
等毒性實(shí)驗(yàn), 以期為使用提供安全依據(jù)。
2 材料和方法
2.1 樣 品
由陜西神龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的漢蓮牌紅靈丹
膠囊, 規(guī)格: 0.4 g/粒, 生產(chǎn)批號: 20121101, 置陰涼
干燥處保存。人口服推薦用量為每人(成人)每日2 次,
每次2 粒, 成人體重按60 kg 計(jì)算, 折合劑量為
26.7mg/kg·bw。取膠囊內(nèi)容物進(jìn)行試驗(yàn)。
2.2 實(shí)驗(yàn)動物及飼養(yǎng)
SPF 級健康昆明種小鼠, 由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)
動物中心繁殖, 實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號: SCXK(陜)
2010-0001, 實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證號: 0001248; SPE 級
SD 種大鼠, 由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心繁殖, 實(shí)
驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號: SCXK(陜)2010-0002, 實(shí)驗(yàn)動
物質(zhì)量合格證號: 0001249, 實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號:
SYXK(陜)2008-0003。實(shí)驗(yàn)動物室溫度: 22~25℃, 相
對濕度: 55%~70%。
2.3 儀器與試劑
2.3.1 主要儀器
超凈生物工作臺(蘇州蘇云凈化設(shè)備有限公司);
恒溫孵化箱(樂陵黎明孵化設(shè)備有限公司); U-400 全
自動生化分析儀(日本OLYMPUS 公司); 全自動血液
分析儀(長春光機(jī)醫(yī)療儀器有限公司); OLYMPUS 生
物顯微鏡(日本OLYMPUS 公司)。
2.3.2 主要試劑
2.4.7-TNFone、疊氮鈉(NaN3)、2-AF 和1.8-二羥
基蒽醌(美國Sigma 公司); 絲裂霉素C(mitomycin,
MMC)( 江蘇恒瑞醫(yī)藥有限公司); 環(huán)磷酞胺
(cyclophosphamide, CP)(上海華聯(lián)制藥有限公司)。自
制大鼠肝S9 由多氯聯(lián)苯誘導(dǎo), 經(jīng)鑒定合格后保存于
?80 ℃。
2.4 急性毒性試驗(yàn)
采用最大給藥量試驗(yàn)法, 選體重18~22 g 的昆明
種小鼠20 只, 雌雄各半。試驗(yàn)前動物禁食16 h, 不限
飲水。稱取20.0 g 樣品, 加純水至40 mL, 混勻、配
成500 mg/mL 濃度溶液, 然后給動物灌胃3 次(每次
間隔4 h), 每次灌胃量為0.4 mL/20 g·bw, 合計(jì)劑量
為30000 mg/kg·bw。灌胃后觀察、記錄動物的中毒表
現(xiàn)。每周稱重1 次, 觀察兩周時間, 試驗(yàn)結(jié)束解剖動
物進(jìn)行大體觀察。按毒性分級標(biāo)準(zhǔn)評價受試物的急性
毒性。
1090 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報 第6 卷
2.5 遺傳毒性試驗(yàn)
2.5.1 Ames 試驗(yàn)
采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸
缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102 四種菌株進(jìn)
行試驗(yàn)。用純水將樣品分別配成50、10、2、0.4 和
0.08 mg/mL 5 個濃度作為受試溶液, 經(jīng)高壓滅菌
(0.103 Mpa、20 min)處理后供試驗(yàn)用。以多氯聯(lián)苯誘
導(dǎo)的大鼠肝微粒體酶(S-9)作為體外代謝活化系統(tǒng)。采
用平板滲入法, 在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入0.1
mL 試驗(yàn)菌株增菌液、0.1 mL 受試物溶液和0.5 mol/L
lS-9 混合液(當(dāng)需要代謝活化時), 混勻后倒入底層培
養(yǎng)基平板上。5 個試驗(yàn)劑量分別為5000、1000、200、
40 和8 μg·皿-1, 同時設(shè)自發(fā)回變對照、溶劑對照和陽
性突變劑對照。自發(fā)回變對照除不加樣品外, 其余條
件與樣品組相同。溶劑對照用滅菌純水替代樣品, 其
余條件與樣品組相同。每個劑量組的各種菌株均做3
個平行皿。在37 ℃下培養(yǎng)48 h, 計(jì)數(shù)每皿的菌落數(shù)。
整套試驗(yàn)在相同條件下重復(fù)做兩次。如果受試物的回
變菌落數(shù)增加超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2 倍以上, 并具
有計(jì)量-反應(yīng)關(guān)系者, 即為誘導(dǎo)試驗(yàn)陽性。
2.5.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)
采用間隔2 h 兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗(yàn)。選體重
為25~30 g 的昆明種小鼠50 只, 隨機(jī)分成5 組, 每組
10 只, 雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組3 個劑量分別設(shè)10000、5000
和2500 mg/kg·bw, 以純水為陰性對照, 40 mg/kg·bw
劑量的環(huán)磷酰胺(cp)作為陽性對照。分別稱取20.0、
10.0 和5.0 g 樣品, 各加純水至40 mL, 混勻、配成
500 、250 和125 mg/mL 濃度溶液, 然后按0.4
mg/20g·bw 的體積給動物灌胃, 陰性對照組灌給等體
積的純水, 陽性對照組灌給等體積的2 mg/mL 環(huán)磷酰
胺溶液。第二次給樣后6 h 頸椎脫臼處死動物, 取胸骨
骨髓用小牛血清稀釋涂片, 甲醇固定, Giemsa 染色。
在光學(xué)顯微鏡下, 每只動物計(jì)數(shù)1000 個嗜多染紅細(xì)胞
(PCE), 微核率以含微核的PCE 千分率計(jì), 同時計(jì)數(shù)
200 個嗜多染紅細(xì)胞, 計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)
胞的比值(PCE/NCE)。采用泊松分布均數(shù)比較法統(tǒng)計(jì)
處理。如試驗(yàn)組的微核率比陰性對照組增高, 并有明
顯的計(jì)量-反應(yīng)關(guān)系和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 即為陽性結(jié)果。
2.5.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)
選體重為25~35 g 的昆明種雄性小鼠50 只, 隨
機(jī)分成5 組, 每組10 只。試驗(yàn)組3 個劑量分別設(shè)
10000、5000 和2500 mg/kg·bw, 以純水為陰性對照,
40 mg/kg·bw 劑量的環(huán)磷酰胺(cp)作為陽性對照。分
別稱取20.0、10.0 和5.0 g 樣品, 各加純水至40 mL,
混勻、配成500、250 和125 mg/mL 濃度溶液, 然后
按0.4 mg/20 g·bw 的體積給動物灌胃, 陰性對照組灌
給等體積的純水, 陽性對照組灌給等體積的2 mg/mL
環(huán)磷酰胺溶液。每天灌胃一次, 連續(xù)5 d。末次給樣
后第30 d 處死動物, 取副睪的精子涂片, 甲醇固定,
伊紅染色。在光學(xué)顯微鏡下, 每只動物計(jì)數(shù)完整精子
1000 個, 計(jì)算精子畸形率, 采用X2 檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。
如試驗(yàn)組的精子畸形率比陰性對照組增高, 并有明
顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 即為陽性結(jié)果。
2.6 大鼠30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)
選SD 種大鼠80 只, 雌雄各半, 雄鼠體重
(78.3±6.5) g, 雌鼠體重(74.5±6.5) g。將動物隨機(jī)分成
4 組, 即陰性對照組和3 個試驗(yàn)組, 每組20 只, 雌雄
各半。3 個試驗(yàn)組劑量分別設(shè)為1335.0、2002.5 和
2670.0 mg/kg·bw, 分別相當(dāng)于人體推薦劑量的50、
70 和100 倍。分別稱取53.4、80.1 和106.8 g 樣品, 各
加純水至400 mL, 混勻、配成133.5、200.25 和267.0
mg/mL 濃度溶液, 按1.0 mL/100 g GW 的體積給相應(yīng)
劑量組動物灌胃, 陰性對照組灌給相同體積的純水,
每天灌胃一次, 連續(xù)灌胃30 d。
實(shí)驗(yàn)期間所有動物給予普通飼料, 單籠飼養(yǎng),
自由攝食飲水。每天觀察動物的活動和生長情況, 每
周加食2 次, 記錄給食量和剩食量, 每周稱一次體重,
計(jì)算每周進(jìn)食量和食物利用率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束動物禁食過
夜, 次日早上稱動物空腹體重, 然后處死大鼠, 采2
份血樣, 一份血抗凝用血球計(jì)數(shù)儀檢測血紅蛋白
(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)及其分類、血小
板(PLT)等; 另一份血不抗凝分離血清, 用試劑盒和
全自動生化分析儀檢測血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙
轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽固醇
(TC)、甘油三酯(TG)、血葡萄糖(Glu)、總蛋白(TP)、
血清白蛋白(Alb)等項(xiàng)目。采血后解剖動物, 進(jìn)行大體
觀察, 取肝臟、腎臟、脾臟和睪丸等臟器進(jìn)行稱重, 計(jì)
算臟/體比值, 取肝臟、腎臟、脾臟、胃、十二指腸、
睪丸和卵巢等臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。在對各劑量
組動物作大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變和生化指標(biāo)改變
時, 只進(jìn)行高劑量組和對照組動物的主要臟器的組
織病理學(xué)檢查, 如發(fā)現(xiàn)病變則對中、低劑量組相應(yīng)器
官及組織進(jìn)行檢查。
第3 期 宋愿智, 等: 漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)安全性評價研究 1091
2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。在統(tǒng)
計(jì)分析時, 先對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn), 若方差齊,
采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較, 發(fā)現(xiàn)差異再用
Dunnett 檢驗(yàn)進(jìn)行多個劑量組與對照組均數(shù)間的兩兩
比較。
3 結(jié)果與分析
3.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果
以最大給藥量(計(jì)量為30000 mg/kg·bw)的樣品
給予小鼠灌胃后, 未見動物有中毒癥狀, 無動物死亡,
試驗(yàn)結(jié)束解剖動物, 大體觀察未見異常, 急性經(jīng)口毒
性屬無毒級。結(jié)果見表1。
3.2 遺傳毒性試驗(yàn)
3.2.1 Ames 試驗(yàn)
從表2、表3 可見, 對TA97a、TA98、TA100TA102
四種試驗(yàn)菌株, 無論是否加入S-9, 樣品各劑量組的
回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回落均數(shù)的兩倍, 亦無計(jì)
量-反應(yīng)關(guān)系, 表明該受試物誘變試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
3.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)
從表4 可見, 樣品各劑量組小鼠的骨髓細(xì)胞微核
率與陰性對照組比較, 差異均無顯著性(P>0.05), 而
環(huán)磷酰胺(cp)與陰性對照組比較差異有極顯著性(P＜
0.01)。未見該樣品對小鼠的骨髓細(xì)胞有損傷作用。
3.2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)
從表5 可見, 樣品對小鼠精子畸形發(fā)生率未產(chǎn)生
明顯改變, 樣品各劑量組的精子畸形率與陰性對照
組比較, 差異均無顯著性(P>0.05), 而環(huán)磷酰胺(cp)
與陰性對照組比較差異有極顯著性(P＜0.01)。未見該
產(chǎn)品對小鼠精子產(chǎn)生畸變作用。
3.3 大鼠30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)
以 2670.0、2002.5 和1335.0 mg/kg·bw(分別相當(dāng)
于人體推薦用量100、75 和50 倍)3 個劑量的樣品連
續(xù)給大鼠灌胃30 d, 實(shí)驗(yàn)期間動物的生長發(fā)育良好,
各劑量組的動物體重、增重量、進(jìn)食量、食物利用率、
表1 漢蓮牌紅靈丹膠囊對小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
Table 1 Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule on mice of acute toxicity test results
性別
動物數(shù)
(只)
途徑 劑量 初始體重
(g)
第7 d 體重
(g)
第14 d 體重
(g)
出現(xiàn)中毒癥狀
動物數(shù)(只)
死亡數(shù)
(mg/kg·bw) (只)
雄 10 經(jīng)口 30000 19.7±1.4 25.9±1.5 31.4±2.0 0 0
雌 10 經(jīng)口 30000 19.4±1.5 24.6±2.1 29.5±2.3 0 0
表2 漢蓮牌紅靈丹膠囊Ames 試驗(yàn)結(jié)果(第一次)
Table 2 The experimental results of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule (The first time)
劑量組
(μg/皿)
TA97a TA98 TA100 TA102
-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9
5000 126.7±14.3 138.3±17.1 36.0±4.6 39.3±2.1 144.7±11.1 160.7±18.0 271.7±26.1 272.0±24.3
1000 122.7±18.2 131.7±12.4 38.7±3.8 44.0±3.6 160.3±10.8 156.7±18.2 277.7±15.3 268.7±22.0
200 136.0±19.2 143.0±11.3 40.3±5.1 42.3±2.5 153.0±19.5 167.3±16.7 285.3±15.0 279.0±16.5
40 132.0±11.4 123.0±18.3 38.7±4.6 41.3±3.8 164.3±12.3 163.3±17.2 276.7±20.6 281.0±14.8
8 130.0±16.7 134.3±12.2 40.7±5.1 38.3±3.5 163.7±14.6 164.3±15.6 270.3±23.7 277.3±18.9
自發(fā)回變 129.3±19.6 129.7±20.4 40.3±3.1 41.0±5.3 157.7±10.2 162.3±19.0 275.3±18.2 281.0±16.5
溶劑對照 121.7±15.6 128.7±12.4 39.0±5.6 43.7±4.0 168.3±15.3 161.7±23.9 266.3±16.3 273.0±17.1
陽性對照 2566.7±251.7 1666.7±208.2 2900.0±264.6 5833.3±208.2 2966.7±152.8 2866.7±115.5 886.7±37.9 856.7±25.2
注: 1、以上結(jié)果(菌落數(shù))均為3 個平皿的均值±標(biāo)準(zhǔn)差。2、陽性對照: TA97a+S9、TA98a+S9、TA100+S9 采用2-氨基芴(計(jì)量為10 μg/皿);
TA98-S9 采用柔毛霉素(計(jì)量為6 μg/皿); TA97a-S9、TA102-S9 采用敵克松(計(jì)量為50 μg/皿); TA100-S9 采用疊氮鈉(計(jì)量為1.5 μg/皿);
TA102+S9 采用1,8-二羥基蒽醌(計(jì)量為50 μg/皿)。
1092 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報 第6 卷
表3 漢蓮牌紅靈丹膠囊Ames 試驗(yàn)結(jié)果(第二次)
Table 3 The experimental results of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule (The second time)
劑量組
(μg/皿)
TA97a TA98 TA100 TA102
?S9 +S9 ?S9 +S9 ?S9 +S9 ?S9 +S9
126.0±16.5 140.0±12.8 36.0±5.6 35.0±3.0 165.3±11.4 154.0±12.1 267.0±19.5 277.0±14.4
1000 146.0±18.3 140.0±18.0 40.7±3.5 41.7±4.7 168.0±16.5 160.0±16.5 279.3±26.3 273.7±17.4
200 138.7±16.6 131.7±15.3 36.7±7.2 40.0±6.0 170.3±16.6 158.3±18.2 265.7±18.5 264.7±15.5
40 129.3±18.5 128.7±18.6 35.0±4.4 39.3±4.0 157.3±14.0 161.7±20.5 264.0±14.0 276.3±19.6
8 135.0±11.5 135.3±13.2 41.7±4.5 38.0±2.0 156.3±18.2 164.0±19.5 265.0±20.9 260.3±25.0
自發(fā)回變 133.3±15.3 138.0±10.5 40.0±5.0 42.3±5.7 161.7±19.4 155.0±17.5 264.0±16.5 277.0±13.8
溶劑對照 135.3±11.9 131.0±13.1 39.0±4.0 37.3±6.1 164.3±13.1 164.0±15.5 273.0±18.3 267.0±17.1
陽性對照 2633.3±208.2 1866.7±152.8 2766.7±251.7 5800.0±264.6 2766.7±208.2 3033.3±305.5 893.3±41.6 850.0±26.5
注: 以上結(jié)果(菌落數(shù))均為3 個平皿的均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
表4 漢蓮牌紅靈丹膠囊對小鼠的骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率的影響
Table 4 Effects of the incidence of bone marrow cells micronucleus in mice of Hanlian brand Monascus
Ganoderma Salvia capsule
性別 劑量組/
(mg/kg·bw)
動物數(shù)/
(只)
受檢PCE 數(shù)
/(個)
含微核PCE 數(shù)/
(個)
微核率/
(‰)
受檢PCE數(shù)/
(個)
NCE 數(shù)
/(個)
PCE/NCE
雄 10000 5 5x1000 6 1.2±0.4 5x200 935 1.078±0.109
5000 5 5x1000 7 1.4±0.5 5x200 932 1.076±0.070
2500 5 5x1000 5 1.0±0.7 5x200 961 1.050±0.113
0 5 5x1000 5 1.0±0.7 5x200 943 1.066±0.084
40(cp) 5 5x1000 122 24.4±4.1** 5x200 1035 0.978±0.123
雌 10000 5 5x1000 5 1.0±0.7 5x200 935 1.078±0.109
5000 5 5x1000 5 1.0±1.0 5x200 932 1.076±0.070
2500 5 5x1000 4 0.8±0.4 5x200 961 1.050±0.113
0 5 5x1000 6 1.2±0.4 5x200 943 1.066±0.084
40(cp) 5 5x1000 123 24.6±3.0** 5x200 1025 0.992±0.147
注: **與陰性對照組比較, P<0.01。
表5 漢蓮牌紅靈丹膠囊對小鼠的精子畸形發(fā)生率的影響
Table 5 The influence of sperm deformity rate in mice of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule
劑量組/
(mg/kg·bw)
動物數(shù)/
(只)
受檢
精子數(shù)
/(個)
精子
畸形率
/(% )
各類精子畸形的構(gòu)成比(%)
無定形 香蕉形 無鉤 雙尾 雙頭 胖頭 尾折疊
數(shù)量 比值數(shù)量比值數(shù)量比值數(shù)量比值數(shù)量 比值 數(shù)量 比值數(shù)量比值
10000 10 10000 1.28±0.32 101 78.9 13 10.2 13 10.2 0 0.0 0 0.0 0 0.0 1 0.8
5000 10 10000 1.44±0.27 109 75.7 18 12.5 14 9.7 0 0.0 0 0.0 1 0.7 2 1.4
2500 10 10000 1.32±0.26 101 76.5 15 11.4 13 9.8 0 0.0 0 0.0 0 0.0 3 2.3
0 10 10000 1.26±0.39 98 77.8 14 11.1 11 8.7 0 0.0 0 0.0 1 0.8 2 1.6
40(cp) 10 10000 4.24±0.47** 334 78.8 45 10.6 36 8.5 0 0.0 0 0.0 1 0.2 8 1.9
注: **與陰性對照組比較, P<0.01。
第3 期 宋愿智, 等: 漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)安全性評價研究 1093
血常規(guī)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器重量及臟器/體重比
值與對照組比較, 均無顯著性差異(P＞0.05); 大體
解剖觀察和組織病理學(xué)檢查未見與樣品有關(guān)的異常
改變, 提示未見該樣品30 d 喂養(yǎng)對大鼠有毒性作用。
結(jié)果見表6~表14。
4 總 結(jié)
本品參照《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》及相
關(guān)文獻(xiàn)[13,14], 對漢蓮牌紅靈丹膠囊進(jìn)行了毒理學(xué)安
全性評價, 結(jié)果表明, 本品以最大給藥量(劑量為
表6 漢蓮牌紅靈丹膠囊對大鼠體重增長和食物利用率的
影響( X ±S )
Table 6 Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia
capsule on weight gain and food utilization rate of rats
( X ±S )
性
別
劑量組
(mg/kg·bw)
動
物
數(shù)
(只)
體重增重
(g)
進(jìn)食量
(g)
食物利
用率(%)
雄 高劑量 10 65.0±10.5 197.7±23.8 32.7±1.8
中劑量 10 65.2±3.0 201.9±12.4 32.3±0.8
低劑量 10 66.0±3.9 212.4±12.8 31.1±0.7
對照組 10 61.7±6.9 196.0±24.2 31.5±1.2
雌 高劑量 10 35.5±6.7 157.6±25.6 22.5±1.5
中劑量 10 32.7±6.9 155.0±27.8 21.0±1.3
低劑量 10 32.9±5.9 158.1±23.9 20.8±1.2
對照組 10 34.3±2.1 159.3±13.6 21.6±1.3
30000 mg/kg·bw)的樣品給予小鼠灌胃后, 未見動物
有中毒癥狀和死亡, 急性經(jīng)口毒性屬無毒級。三項(xiàng)遺
傳毒性試驗(yàn)(Ames 試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小
鼠精子畸形試驗(yàn))結(jié)果均為陰性。30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn), 以
1335.0、2002.5 和2670.0 mg/kg·bw 3 個劑量(分別相
當(dāng)于人體推薦用量50、75 和100 倍)的樣品連續(xù)給大
鼠灌胃30 d, 試驗(yàn)期間動物生長發(fā)育良好, 各劑量組
大鼠的體重、增重量、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)
指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、臟器重量及臟器/體重比值等
均未受明顯影響; 大體解剖觀察和組織病理學(xué)檢查
表7 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束大鼠血常規(guī)指
標(biāo)檢查結(jié)果( X ±S )
Table 7 Rats routine blood test results after 30 d feeding
test of Hanlian brand Monascus Ganoderma
Salvia capsule ( X ±S )
性
別
劑量組
(mg/kg·bw)
動物數(shù)
(只)
血紅蛋白
(g/L)
紅細(xì)胞
(1012/L)
血小板
(109/L)
雄高劑量 10 145.2±15.2 7.33±0.77 790.1±266.6
中劑量 10 147.2±7.6 7.72±0.37 720.6±252.4
低劑量 10 149.2±9.7 7.49±0.49 819.0±180.9
對照組 10 148.4±8.5 7.67±0.28 823.4±205.3
雌高劑量 10 147.6±5.8 7.50±0.48 837.2±277.1
中劑量 10 151.1±7.6 7.74±0.39 857.0±254.4
低劑量 10 150.6±10.8 7.67±0.62 890.6±201.7
對照組 10 151.6±4.5 7.75±0.45 797.0±232.1
表8 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束大鼠血常規(guī)指標(biāo)檢查結(jié)果( X ±S)
Table 8 Rats routine blood test results after 30 d feeding test of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule
( X ±S )
性別 劑量組 動物數(shù)
(只)
白細(xì)胞
(109/L)
白細(xì)胞分類(%)
淋巴細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 單核細(xì)胞 嗜酸細(xì)胞 嗜堿細(xì)胞
雄 高劑量 10 8.21±1.24 76.3±4.7 17.3±4.0 4.51±1.00 1.56±1.01 0.27±0.21
中劑量 10 8.79±1.54 75.9±4.4 17.7±3.5 4.96±1.55 1.21±0.88 0.24±0.11
低劑量 10 8.55±3.34 78.1±2.5 16.2±2.9 4.33±1.41 1.26±0.79 0.17±0.21
對照組 10 8.20±1.57 75.4±2.2 18.2±2.2 4.64±1.89 1.53±0.43 0.23±0.17
雌 高劑量 10 8.48±2.03 77.0±4.2 16.5±3.1 4.85±1.12 1.54±0.59 0.15±0.18
中劑量 10 8.35±1.85 77.3±3.1 16.5±2.1 4.38±1.67 1.61±1.15 0.15±0.14
低劑量 10 8.01±2.23 77.5±5.4 16.2±5.3 4.90±1.19 1.17±0.28 0.27±0.14
對照組 10 8.55±1.57 77.1±3.3 16.8±2.5 4.38±1.77 1.46±1.17 0.20±0.22
1094 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報 第6 卷
表9 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束大鼠血液生化指標(biāo)檢查結(jié)果( X ±S )
Table 9 Rats blood biochemical indexes test results after 30 d feeding test of Hanlian brand Monascus
Ganoderma Salvia capsule ( X ±S )
性別 劑量組
(mg/kg·bw)
動物數(shù)
(只)
谷草轉(zhuǎn)氨酶
(U/L)
谷丙轉(zhuǎn)氨酶
(U/L)
尿素氮
(mmol/L)
肌酐
(μmol/L)
雄 高劑量 10 100.98±12.08 43.00±8.49 6.50±0.67 36.96±3.86
中劑量 10 93.05±6.62 38.58±5.22 6.50±0.44 36.49±2.71
低劑量 10 103.58±9.48 40.78±5.61 6.57±0.74 37.38±4.25
對照組 10 94.95±10.39 40.14±6.74 6.63±0.86 38.18±2.37
雌 高劑量 10 99.37±7.88 40.23±8.49 7.23±0.79 37.23±3.41
中劑量 10 95.50±8.16 39.25±6.42 6.62±0.66 36.23±1.76
低劑量 10 91.64±10.25 41.66±6.26 7.15±0.84 36.58±5.58
對照組 10 101.20±10.00 41.14±9.50 6.95±0.97 38.82±2.90
表10 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束大鼠血液生化指標(biāo)檢查結(jié)果( X ±S )
Table 10 Rats blood biochemical indexes test results after 30 d feeding test of Hanlian brand Monascus Ganoderma
Salvia capsule ( X ±S )
性別 劑量組
動物數(shù)
(只)
膽固醇
(mmol/L)
甘油三酯
(mmol/L)
總蛋白
(g/L)
白蛋白
(g/L)
血糖
(mmol/L)
高劑量 10 2.28±0.41 1.31±0.25 66.94±5.49 38.40±1.90 5.92±0.63
雄 中劑量 10 2.07±0.26 1.31±0.25 67.80±4.81 38.43±1.63 5.89±0.52
低計(jì)量 10 2.19±0.42 1.29±0.41 70.02±5.38 39.06±1.58 5.86±0.75
對照組 10 2.36±0.28 1.07±0.23 68.09±4.17 38.35±1.69 6.45±0.87
高劑量 10 2.51±0.40 1.07±0.39 68.83±3.96 38.63±1.75 6.21±0.60
雌 中劑量 10 2.79±0.35 1.05±0.16 70.53±3.74 39.43±1.66 6.55±0.66
低計(jì)量 10 2.49±0.37 1.00±0.23 68.94±5.06 38.61±1.78 6.39±0.33
對照組 10 2.72±0.39 1.28±0.27 72.10±3.94 40.08±1.18 6.68±0.62
表11 漢蓮牌紅靈丹膠囊對大鼠臟器重量的影響( X ±S)
Table 11 Impact on the weight of the viscera of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule ( X ±S )
性別 劑量組
動物數(shù)
(只)
空腹體重
(g)
肝臟
(g)
腎臟
(g)
脾臟
(g)
睪丸
(g)
高劑量 10 311.3±20.7 9.625±0.990 2.589±0.350 0.903±0.190 3.081±0.199
雄 中劑量 10 305.1±15.4 9.242±0.566 2.502±0.322 0.828±0.094 3.151±0.220
低計(jì)量 10 308.9±20.1 9.576±0.917 2.587±0.181 0.893±0.082 3.113±0.139
對照組 10 307.0±18.1 9.328±0.785 2.560±0.136 0.878±0.078 3.078±0.203
高劑量 10 214.5±16.1 7.108±0.680 1.641±0.176 0.605±0.106 —
雌 中劑量 10 207.3±16.6 6.463±0.725 1.624±0.137 0.561±0.074 —
低計(jì)量 10 212.4±11.3 6.597±0.301 1.651±0.168 0.614±0.050 —
對照組 10 212.3±9.0 6.923±0.737 1.649±0.173 0.596±0.083 —
第3 期 宋愿智, 等: 漢蓮牌紅曲靈芝丹參膠囊的動物毒理學(xué)安全性評價研究 1095
表12 漢蓮牌紅靈丹膠囊對大鼠臟器/體重比值的影響( X ±S)
Table 12 Impact on the weight of the viscera of Hanlian brand Monascus Ganoderma Salvia capsule ( X ±S )
性別 劑量組 動物數(shù)
(只)
肝臟
(%)
腎臟
(%)
脾臟
(%)
睪丸
(%)
高劑量 10 3.091±0.247 0.832±0.106 0.290±0.056 0.993±0.089
雄 中劑量 10 2.978±0.228 0.807±0.122 0.267±0.032 1.016±0.093
低計(jì)量 10 3.096±0.153 0.839±0.048 0.289±0.018 1.011±0.072
對照組 10 3.047±0.308 0.836±0.055 0.287±0.035 1.005±0.080
高劑量 10 3.312±0.164 0.765±0.054 0.281±0.037 —
雌 中劑量 10 3.120±0.260 0.784±0.038 0.270±0.024 —
低計(jì)量 10 3.113±0.207 0.776±0.056 0.290±0.033 —
對照組 10 3.267±0.375 0.778±0.091 0.282±0.045 —
表13 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)大鼠肝臟組織病理學(xué)檢查結(jié)果
Table 13 Rats liver histopathological examination results after 30 d feeding test of Hanlian brand Monascus Ganoderma
Salvia capsule
病 變
雄鼠出現(xiàn)病變的動物數(shù) 雌鼠出現(xiàn)病變的動物數(shù)
高劑量組 對照組 高劑量組 對照組
肝細(xì)胞 變性 2 / 10 0 / 10 0 / 10 1 / 10
點(diǎn)狀壞死 1 / 10 1 / 10 1 / 10 1 / 10
炎細(xì)胞浸潤 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
間質(zhì) 血管擴(kuò)張 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0/ 10
炎細(xì)胞浸潤 1 / 10 1 / 10 1 / 10 1 / 10
纖維化 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
其他 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
表14 漢蓮牌紅靈丹膠囊30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)大鼠腎臟組織病理學(xué)檢查結(jié)果
Table 14 Rats renal histopathological examination results after 30 d feeding test of Hanlian brand
Monascus Ganoderma Salvia capsule
病 變
雄鼠出現(xiàn)病變的動物數(shù) 雌鼠出現(xiàn)病變的動物數(shù)
高劑量組 對照組 高劑量組 對照組
腎小球 濁腫 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
壞死 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
炎細(xì)胞浸潤 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
腎小管 變性 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
壞死 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
炎細(xì)胞浸潤 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
間質(zhì) 血管擴(kuò)張 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0/ 10
炎細(xì)胞浸潤 1 / 10 1 / 10 2 / 10 1 / 10
纖維化 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
其他 0 / 10 0 / 10 0 / 10 0 / 10
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1096 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報 第6 卷
未見與樣品有關(guān)的異常改變。結(jié)果提示, 該樣品30 d
喂養(yǎng)對大鼠各項(xiàng)觀察指標(biāo)未產(chǎn)生毒副作用。說明該產(chǎn)
品在本實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)無毒, 無遺傳毒性。
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(責(zé)任編輯: 楊翠娜)
作者簡介
宋愿智, 副主任藥師, 主要研究方向
為食品藥品安全檢測。
E-mail shipnshi@126.com

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